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生長期兔髁突軟骨細胞體外培養方法及其生物學特性研究

   近日,上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院·口腔醫學院口腔外科,上海市口腔醫學重點實驗室研究人員發表論文,旨在建立髁突軟骨細胞體外培養模型,研究其生物學特性。研究指出,使用本方法培養兔髁突軟骨細胞簡單有效。髁突軟骨細胞體外培養存在去分化現象,但P2代以內的髁突軟骨細胞生物學特性相對穩定,適合用於後期實驗研究,P3代以後的髁突軟骨細胞逐漸喪失原有細胞的特性。該文發表在2014年第01期《中國口腔颌面外科雜志》上。

      分離4周齡健康新西蘭大白兔雙側髁突軟骨,采用胰酶和膠原酶聯合消化方法收集4h和12h2個時間點的髁突軟骨細胞,連續體外培養並傳代至P10。使用倒置顯微鏡觀察細胞形態;采用甲苯胺藍、阿利新藍和免疫細胞化學染色對髁突軟骨細胞進行鑒定;利用細胞計數繪制細胞生長曲線;通過Western免疫印跡分析細胞Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原和SOX9在蛋白水平的表達情況。采用SPSS13.0軟件包對Western印跡條帶灰度值進行統計學分析。     兔髁突軟骨細胞體積較大,呈紡錘形或多角形,鋪路石樣排列,細胞爬片染色結果為陽性。隨著細胞傳代”成纖維樣“細胞比例逐漸加重,P2代之前的細胞形態差異較小。細胞生長曲線顯示,兔髁突軟骨細胞的體外培養符合經典的S形生長曲線。Western印跡結果表明,4h和12h所收髁突軟骨細胞Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原和SOX9表達無顯著差異。
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